乳酸脫氫酶檢測(cè)試劑盒，LDH試劑盒

上海信帆生物為您提供乳酸脫氫酶試劑盒說(shuō)明書(shū)，提供乳酸脫氫酶實(shí)驗(yàn)檢測(cè)服務(wù)，歡迎大家前來(lái)咨詢！

乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）幾乎存在于所有組織中，以心、骨骼肌和腎臟豐富，其次為肝、脾、胰腺、腦、肺臟等。采用電泳法可將人組織中的乳酸脫氫酶同工酶分離出5種同工酶區(qū)帶，根據(jù)其電泳遷移率的快慢，依次為L(zhǎng)DH-1、LDH-2、LDH-3、LDH-4、LDH-5。乳酸脫氫酶同工酶分布存在明顯的特異性，可用于心肌疾病的診斷。
 

乳酸脫氫酶（Lactate Dehydrogenase，LDH）試劑盒說(shuō)明書(shū)
 

分光光度法
 

規(guī)格：50 管/24 樣
 

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：30mL×1 瓶， 4℃保存；

試劑一：液體 15 mL×1 瓶， 4℃保存；

試劑二：粉劑×1 支，-20℃保存，用時(shí)加入 1.3 mL 雙蒸水充分溶解備用，配好后-20 ℃保存，可保存兩周，禁

止反復(fù)凍融；

試劑三：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存；

試劑四：液體 50 mL×1 瓶，4℃保存；

乳酸脫氫酶檢測(cè)試劑盒，LDH試劑盒
 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

LDH（EC 1.1.1.27）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是糖酵解途徑的末端酶，催化丙酮酸與

乳酸之間的可逆反應(yīng)，伴隨著 NAD+

/NADH 之間互變。

LDH 催化 NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸進(jìn)一步與 2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在堿

性溶液中顯棕紅色，顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：

可見(jiàn)分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
 

操作步驟：

一、樣品測(cè)定的準(zhǔn)備：

1. 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清，按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10

4個(gè)）：提取液體積

（mL）為 500-1000:1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，

功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次），8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）為 1:5-10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），

進(jìn)行冰浴勻漿；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

3. 血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。
 

二、測(cè)定操作：

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 450nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 樣本測(cè)定（在 EP 管中加入下列試劑）

試劑名稱(μL) 測(cè)定管 對(duì)照管

樣本 50 50

試劑一 250 250

試劑二 50

蒸餾水 50

充分混勻，37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）水浴 15min

試劑三 250 250

充分混勻，37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）水浴 15min

試劑四 750 750

充分混勻，室溫靜置 3min，450 nm 下測(cè)定吸光度，計(jì)算ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管需要設(shè)一個(gè)對(duì)

照管。
 

LDH 活力單位計(jì)算：

1. 標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸曲線， y = 0.725x (x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度，μmol/mL；y 為對(duì)吸光度)。

2. 血清（漿）LDH 活力的計(jì)算

單位的定義：每 mL 血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。

LDH（U/mL）=ΔA÷0.725÷T×10

3=92×ΔA
 

3. 細(xì)胞、細(xì)菌和組織中 LDH 活力的計(jì)算

（1） 按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1 nmol 丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。

LDH（U/mg prot）=[ΔA÷0.725×V 1] ÷ (V1×Cpr) ÷T×10

3 =92×ΔA÷Cpr

需要另外測(cè)定，建議使用本公司 BCA 蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒。

（2） 按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。

LDH（U/g 鮮重）=[ΔA÷0.725×V 1] ÷ (W ×V1÷V2) ÷T×10

3 =92×ΔA÷W
 

（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

單位的定義：每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。

LDH（U/10

4 cell）= [ΔA÷0.725×V 1]÷(500 ×V1÷V2) ÷T×10

3 =0.184×ΔA÷W

V1：加入反應(yīng)體系中樣本的體積，0.05 mL；V2：加入提取液的體積，1 mL； T：反應(yīng)時(shí)間，15 min；Cpr：

蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g; 500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500 萬(wàn)。

乳酸脫氫酶檢測(cè)試劑盒，LDH試劑盒