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無(wú)機(jī)磷檢測(cè)試劑盒(硫酸亞鐵鉬藍(lán)微板法)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

血清中的無(wú)機(jī)磷(Inorganic phosphorous)主要由H2PO4-和HPO42-兩種磷酸根陰離子組成，上述陰離子在在丌同的pH環(huán)境下能快速相互轉(zhuǎn)換。在pH7.4血清中，二者濃度比例為1:4；在酸中毒環(huán)境下二者濃度約為1:1；在堿中毒環(huán)境下二者濃度比例為1:9；在pH4.5尿液中濃度比例為100:1。WHO推薦的常規(guī)檢測(cè)方法為比色法，我國(guó)衛(wèi)生部臨檢中心推薦的常規(guī)方法為硫酸亞鐵鉬藍(lán)比色法和米吐?tīng)栥f藍(lán)比色法。

無(wú)機(jī)磷檢測(cè)試劑盒(硫酸亞鐵鉬藍(lán)微板法)是先經(jīng)硫酸亞鐵提純蛋白，利用無(wú)機(jī)磷不鉬酸銨結(jié)合生成磷鉬酸銨，后者被硫酸亞鐵還原成藍(lán)紫色的復(fù)合物，通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)640nm處吸光度值，根據(jù)公式計(jì)算出無(wú)機(jī)磷含量。本試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，丌宜用于臨床診斷戒其他用途。

自備材料：
1、 EP管
2、 離心機(jī)
3、 酶標(biāo)儀

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操作步驟(僅供參考)：

1、 (選做)制備樣品：
① 血漿、血清樣品：取0.02ml待測(cè)血漿、血清樣品，加入0.48ml Pi Assay buffer，充分混勻，室溫靜置10min，3000g離心10min，取上清，-20℃凍存，用于Pi的檢測(cè)。
② 尿液樣品：取適量的待測(cè)尿液，用50%的鹽酸調(diào)pH至6.0。用蒸餾水做1:10-1:20稀釋。取0.02ml稀釋后的尿液樣品，加入0.48ml Pi Assay buffer，充分混勻，室溫靜置10min，3000g離心10min，取上清，-20℃凍存，用于Pi的檢測(cè)。
③ 細(xì)胞戒組織樣品：取恰當(dāng)細(xì)胞戒組織進(jìn)行勻漿，低速離心取上清。取0.02ml勻漿樣品，加入0.48ml Pi Assay buffer，充分混勻，室溫靜置10min，3000g離心10min，取上清，-20℃凍存，用于Pi的檢測(cè)。
④ 高濃度樣品：如果樣品中含有較高濃度的Pi，可以使用去離子水稀釋。
⑤ (選做)樣品準(zhǔn)備完畢后可以用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度，以便于后續(xù)計(jì)算單位蛋白重量組織戒細(xì)胞內(nèi)的Pi含量。

2、 制備磷標(biāo)準(zhǔn)工作液：取適量的磷標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml)，按磷標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml)：標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液=1:24的比例稀釋，即獲得磷標(biāo)準(zhǔn)(1.292mmol/L)。取0.02ml磷標(biāo)準(zhǔn)(1.292mmol/L)，加入0.48ml Pi Assay buffer，充分混勻，室溫靜置10min，3000g離心10min，取上清，即為磷酸標(biāo)準(zhǔn)工作液，-20℃凍存，用于Pi的檢測(cè)。

3、 Pi檢測(cè)：按下表操作。

4、 混勻，室溫靜置15min，酶標(biāo)儀640nm處檢測(cè)，以空白管調(diào)零，讀取各管吸光度值。
計(jì)算： 血清、血漿中無(wú)機(jī)磷計(jì)算公式：磷(mmol/L)=(A測(cè)定/A標(biāo)準(zhǔn))×1.292 尿液中無(wú)機(jī)磷計(jì)算公式：磷(mmol/d)=(A測(cè)定/A標(biāo)準(zhǔn))×1.292×N×24h尿量(L) 組織中磷計(jì)算公式：磷(mmol/mg)=(A測(cè)定/A標(biāo)準(zhǔn))×1.292/待測(cè)樣品蛋白濃度(mg/L) 式中：A測(cè)定=待測(cè)管的吸光度值 A標(biāo)準(zhǔn)=標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度值 N=尿液稀釋倍數(shù) 單位換算：mg/dl=mmol/L/0.323 參考區(qū)間：健康成年人血清磷濃度：0.96~1.62mmol/L(3~5mg/dl) 兒童血清磷濃度：1.45~2.1mmol/L(4.5~6.5mg/dl)

注意事項(xiàng)：

1、 溶血樣本對(duì)檢測(cè)有干擾，盡量避免采用溶血樣本。

2、 本法能夠用于自動(dòng)生化分析儀終點(diǎn)檢測(cè)法。

3、 如果樣品濃度過(guò)高，應(yīng)用蒸餾水稀釋后重測(cè)，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。

有效期： 12個(gè)月有效。

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