辣根過(guò)氧化物酶實(shí)驗(yàn)中為廣泛的標(biāo)記用酶！

POD是一種具有氧化還原酶性質(zhì)的血紅素蛋白。用于生化研究，是酶標(biāo)記法所用的一種主要酶。也用于生物液體中 葡萄糖和半乳糖的測(cè)定

溶解性10 mg/mL in water 
來(lái)源From horseradish 
別名Donor: hydrogen-peroxide oxidoreductase；Horseradish peroxidase；HRP POD 
英文名稱Peroxidase(POD) 
CAS9003-99-0 
儲(chǔ)存條件-20℃ 
酶活/效價(jià)233-300units/mg solid 
外觀（性狀）褐色結(jié)晶性凍干粉狀
 
 

HRP是一種分子量達(dá)44 000的糖蛋白，由無(wú)色的酶蛋白和深棕色的鐵卟啉結(jié)合而成，中性糖和氨基糖約占18％，主要有甘露糖、木糖、阿拉伯糖和己糖胺等。每一個(gè)HRP分子中含一個(gè)氯化血紅素IX作輔基，該輔基在403nm波長(zhǎng)處有大吸收峰，而去輔基的酶蛋白在275nm波長(zhǎng)處有大吸收。HRP在403nm的OD值與275nm的OD值之比，也就是所謂的RZ(Reinheits Zahl)值。

RZ值僅說(shuō)明血紅素基團(tuán)在HRP中的含量，并非表示HRP制劑的真正純度，而且RZ值高的HRP制劑，并不意味著酶活性也高。但可以一純酶溶液在10mm光徑403nm波長(zhǎng)下的吸光度來(lái)計(jì)算酶濃度[1％(W/V)酶溶液吸光度為22.5，濃度為227umol/L]。HRP干燥貯存于–20oC可保持穩(wěn)定，使用1.36 mol/L甘油、10mmol/L磷酸鈉、30umol/L牛血清白蛋白和20umol/L細(xì)胞色素C(pH 7.4)溶液作為基質(zhì)冷凍保存，可使酶結(jié)合物穩(wěn)定數(shù)年。

HRP對(duì)熱及有機(jī)溶劑的作用比較穩(wěn)定，用甲苯與石蠟切片處理或用純乙醇或l0％甲醛水溶液固定做冷凍切片，均不能使其活性改變。氰hua物或硫化物在10–5～10–6mol/L濃度時(shí)具有可逆性地抑制HRP的作用；氟化物、疊氮化合物或羥胺僅在高于10-3mol／L濃度時(shí)抑制HRP；HRP還可被羥甲基過(guò)氧化氫不可逆地抑制。強(qiáng)酸也是HRP的強(qiáng)烈的抑制劑。

因此，在酶免疫測(cè)定常選用上述的某些化合物如氟化鈉、疊氮鈉和強(qiáng)酸等作為酶反應(yīng)的終止劑。此外，在配制酶免疫測(cè)定的稀釋緩沖液時(shí)，為防止酶失活，應(yīng)避免使用疊氮鈉作防腐劑。HRP的同工酶主要可分為三種類型：

①含糖量高的酸性同工酶。

②等電點(diǎn)接近于中性(或微堿)的含糖量相對(duì)較低的同工酶。

③含糖量低的堿性(PI>11)同工酶。酶免疫試驗(yàn)中所使用的HRP，以PI為8.7～9.0的所謂“C”同工酶為主要組成成分，其他同工酶的活性則很低。“C”同工酶的共價(jià)結(jié)構(gòu)由2個(gè)密切接近的區(qū)域組成，血紅素基團(tuán)則位于其間而成夾心結(jié)構(gòu)，糖鏈以8個(gè)不同的部位結(jié)合于多肽。天然的酶所帶的純電荷極少；無(wú)游離的。—氨基，僅有2個(gè)可測(cè)出的組氨酸，6個(gè)賴氨酸似乎全被糖鏈外殼所遮蓋。因此，HRP一般僅有1～2個(gè)可用于耦聯(lián)的氨基。

HRP之所以是迄今為止在ELISA中應(yīng)用為廣泛的標(biāo)記用酶，主要是因?yàn)槠湟环矫嬉子谔崛?，價(jià)格相對(duì)低廉；另一方面性質(zhì)穩(wěn)定，耐熱及有機(jī)溶劑的作用，與抗原或抗體偶聯(lián)后，活性很少受損失。

辣根過(guò)氧化物酶實(shí)驗(yàn)中為廣泛的標(biāo)記用酶！