GUS染色液使用說明！
 

　　GUS(β-Galactosidase)基因是存在于E.coli等一些細(xì)菌基因組內(nèi)的編碼β-葡萄糖苷酸酶的一種水解酶，該基因常作為融合標(biāo)記用于植物轉(zhuǎn)基因分析和調(diào)控研究中。GUS受體基因系統(tǒng)有表達(dá)E.coli GUS酶的穩(wěn)定性和在植物內(nèi)的低活性，絕大多數(shù)植物沒有檢測到葡萄糖苷酸酶的背景活性，以β-葡萄糖苷酸酯類物質(zhì)為底物，其反應(yīng)產(chǎn)物可用多種方法檢測出來。5-Bromo-chloro-3-indolyl β-D-glucuronide，cyclohexylammonium salt(簡稱為X-Gluc或X-GlcA)分子量為521.8，CAS號為18656-96-7，是檢測大腸桿菌中GUS基因的底物，可快速檢測植物中GUS基因融合標(biāo)記。
 

　　GUS染色液(即用型)又稱β-葡萄糖苷酶基因染色試劑盒(β-Galactosidase Reporter Gene Staining Kit)簡稱為GUS染色液，其染色原理是適宜的反應(yīng)條件下β-葡萄糖苷酶(GUS)可將X-Gluc水解成藍(lán)色物質(zhì)，該物質(zhì)不溶解于轉(zhuǎn)基因的細(xì)胞核組織中的靛藍(lán)物質(zhì)，具有GUS活性的部位或位點(diǎn)呈現(xiàn)藍(lán)色或藍(lán)色斑點(diǎn)，可用肉眼或顯微鏡觀察到，GUS染色液可用于生物化學(xué)活性分析、免疫分析以及組織和細(xì)胞的組織化學(xué)染色，多用于轉(zhuǎn)基因植物的GUS基因表達(dá)分析，該即用型試劑比常規(guī)GUS染色液操作簡便。
 

　　實(shí)驗(yàn)所需用品：
 

　　70%乙醇、去離子水、小瓶或多孔板、顯微鏡
 

　　操作步驟(僅供參考)
 

　　1、配制X-Gluc溶液(50x)：取1ml X-Gluc Solution*加至1支X-Gluc中，充分溶解，即獲得X-Gluc溶液(50x)。配制好的X-Gluc溶液(50x)-20℃保存，1個月有效。
 

　　2、配制X-Gluc染色液：取適量的X-Gluc溶液(50x)和GUS Buffer，按1：49比例充分混勻，配制成X-Gluc染色液，如取0.2ml X-Gluc溶液(50x)加入到9.8ml GUS Buffer中，即配成10ml GUS染色液，該染色液現(xiàn)用現(xiàn)配，短期貯存可以4℃保存3天。
 

　　3、取適量待染葉片等組織加入適量GUS染色液使其*浸沒組織。
 

　　4、37℃孵育1~24h，隨著孵育時間的延長，藍(lán)色漸漸出現(xiàn)，當(dāng)表達(dá)量較高時GUS活性的部位或位點(diǎn)呈現(xiàn)藍(lán)色或藍(lán)色斑點(diǎn)。
 

　　5、用70%乙醇脫去樣本的葉綠素，一般樣本浸沒于乙醇1～3h，至陰性對照呈白色。如有必要可重復(fù)該脫色步驟，以便*清除葉綠素；樣本保存于乙醇中，可用肉眼或普通光學(xué)顯微鏡下觀察，白色背景上的藍(lán)色即為GUS表達(dá)位點(diǎn)。
 

　　注意事項(xiàng)：
 

　　1、GUS染色液在冰上配制，可以4℃避光保存3天。
 

　　2、由于組織特異性等原因，藍(lán)色顏色反應(yīng)可能不*一致，應(yīng)注意摸索具體實(shí)驗(yàn)條件。
 

　　3、擬南芥的根、花和葉片以及煙草幼苗根就可直接染色；煙草和馬鈴薯這些植物的莖和葉須在染色前切成薄片(1~3mm)。
 

　　4、當(dāng)操作大的組織和樣品時可以選用真空滲入法來幫助底物和酶滲入細(xì)胞。
 

　　5、GUS染色液(即用型)染色靈敏度較好，但有時會出現(xiàn)非特異性反應(yīng)(即假陽性)。
 

　　6、本產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)用，不做其它用途！