大鼠孕酮(P)elisa試劑盒顯色和比色

孕酮（progesterone，P）是21C類(lèi)固醇激素，由膽固醇經(jīng)孕烯醇酮通過(guò)異構(gòu)酶轉(zhuǎn)化而成。在婦女，卵巢中的卵泡膜細(xì)胞產(chǎn)生P，期間，P則主要由胎盤(pán)合體滋養(yǎng)細(xì)胞層分泌，故血中P水平主要與胎盤(pán)重量及血液灌注量相關(guān)。孕早期上升較慢，13周后增快，足月時(shí)達(dá)高峰。在血中，P主要與皮質(zhì)類(lèi)固醇結(jié)合蛋白（CBG）及白蛋白相結(jié)合，血液中絕大部分P為結(jié)合型，極少數(shù)為游離型。孕酮主要在肝臟降解，被還原成孕二醇，孕二醇再與硫酸或葡萄糖醛酸結(jié)合后經(jīng)腎排出。P對(duì)調(diào)節(jié)月經(jīng)周期和維持妊娠具有重要的生理作用，可促進(jìn)子宮內(nèi)膜分泌期的轉(zhuǎn)化，為受精卵著床做準(zhǔn)備；松弛子宮肌，降低對(duì)前列腺素和催產(chǎn)素的反應(yīng)性；抑制輸卵管節(jié)律性收縮。P還有促乳腺腺泡增生，增加能量代謝，升高基礎(chǔ)體溫，促進(jìn)水鈉排除的作用。P對(duì)下丘腦-垂體系統(tǒng)具有正、負(fù)反饋?zhàn)饔?，可調(diào)控垂體促性腺激素的合成和分泌。排卵前小劑量孕酮協(xié)同E3誘發(fā)排卵前LH高峰出現(xiàn)，排卵后大劑量P對(duì)下丘腦-垂體系統(tǒng)則呈現(xiàn)負(fù)反饋?zhàn)饔谩?/p>

顯色

　　顯色是ELISA試驗(yàn)中最后一步溫育反應(yīng)，此時(shí)酶催化無(wú)色的底物生成有色的產(chǎn)物。反應(yīng)的溫度和時(shí)間仍是影響顯色的因素。適當(dāng)提高溫度，有助于加速顯色。在一定時(shí)間內(nèi)，陰性孔可保持無(wú)色，而陽(yáng)性孔則隨時(shí)間的延長(zhǎng)而呈色加強(qiáng)。在定量檢測(cè)中，加入底物后的反應(yīng)溫度和時(shí)間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確。ELISA顯色結(jié)果最好通過(guò)酶標(biāo)儀進(jìn)行，可減少實(shí)驗(yàn)誤差，提高臨界值樣本的分析準(zhǔn)確度。盡量避免肉眼直接判斷結(jié)果，因?yàn)椴煌瑐€(gè)體的視覺(jué)存在差異。應(yīng)注意，加顯色劑時(shí)，要保持顯色劑不外流。加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生較多氣泡，否則可能使假陽(yáng)性結(jié)果的出現(xiàn)概率增加。

比色

　　比色的方法有目視法和酶標(biāo)比色法2種。目視法簡(jiǎn)單明了，但對(duì)同一標(biāo)本，操作者的不同有時(shí)會(huì)出現(xiàn)不同的結(jié)果，具有一定的主觀性。比色的結(jié)果通常用光密度表達(dá)，現(xiàn)按規(guī)定用吸光度表達(dá)。酶標(biāo)儀不應(yīng)安置在陽(yáng)光或強(qiáng)光照射下，操作時(shí)的適宜室溫在15℃~30℃之間，使用前要先預(yù)熱儀器15~30min，使測(cè)得結(jié)果更為準(zhǔn)確。比色前，應(yīng)先用潔凈的吸水紙擦拭干凈板底附著的液體，然后將板正確放在酶標(biāo)比色儀的比色架上。綜上所述，優(yōu)質(zhì)的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。在實(shí)際應(yīng)用過(guò)程中，操作者必須熟練掌握基本操作技能，對(duì)每個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行嚴(yán)格仔細(xì)的核查，盡量避免假陽(yáng)性和假陰性反應(yīng)的出現(xiàn)，保證檢測(cè)結(jié)果真實(shí)可靠，為臨床診斷和疾病防治提供可靠的理論依據(jù)。

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