鈣檢測(cè)試劑盒(鄰甲酚酞絡(luò)合酮微板法)的自備材料

產(chǎn)品簡介：

鈣(Calcium)是一種金屬元素，常溫下呈銀白色晶體，動(dòng)物的骨骼、蛤殼、蛋殼都含有碳酸鈣，檢測(cè)生命體鈣含量，主要通過檢測(cè)鈣離子濃度實(shí)現(xiàn)的，用分光度法檢測(cè)鈣較為常見，該法需要合適的金屬指示劑或選擇性結(jié)合鈣離子后引起變色的染料化合物，目前較為常用的染料有鄰-甲酚酞絡(luò)合酮(OCPC)、偶氮砷Ⅲ、甲基麝香草酚藍(lán)(MTB)等。鈣檢測(cè)試劑盒(鄰甲酚酞絡(luò)合酮微板法)是利用溶液中鈣離子在堿性條件下能與 OCPC 結(jié)合，生成紫紅色的絡(luò)合物，加入鎂離子螯合劑，去除鎂離子背景干擾，通過酶標(biāo)儀檢測(cè) 575nm 處吸光度，根據(jù)公式計(jì)算出總鈣含量；該法的優(yōu)點(diǎn)：1、是國際上推薦的血清鈣的常規(guī)檢測(cè)方法；2、試劑單一，操作簡便；3、靈敏度高；4、顯色穩(wěn)定 5、使用樣本量小。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

操作步驟(僅供參考)：

1、制備樣品：

①血漿、血清樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備，可以直接用于該試劑盒的測(cè)定，-20℃凍存，用于 Ca 的檢測(cè)。

②細(xì)胞或組織樣品：取恰當(dāng)細(xì)胞或組織進(jìn)行勻漿，低速離心取上清，-20℃凍存，用于Ca 的檢測(cè)。

③高濃度樣品：如果樣品中含有較高濃度的 Ca，可以使用 ddH2O 稀釋，不宜使用普通蒸餾水稀釋。

④(選做)樣品準(zhǔn)備完畢后可以用 BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度，以便于后續(xù)計(jì)算單位蛋白重量組織或細(xì)胞內(nèi)的 Ca 含量。

2、配制 Ca 顯色工作液：臨用前，取 Ca Assay Buffer 和 OCPC 顯色液等量混合，即為 Ca顯色工作液，即配即用，4℃ 避光保存，不宜久置。

3、Ca 加樣：選用經(jīng)稀鹽酸處理及去離子水清潔的 96 孔板，按照下表設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、測(cè)定孔，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡；如果樣品中的鈣離子含量過

高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，樣品的檢測(cè)最好能設(shè)置平行孔。

參考區(qū)間：健康成年人血清鈣濃度：2.1~2.6mmol/L

兒童血清鈣濃度：2.25~2.67mmol/L

性能指標(biāo)：

線性范圍：1.25~5.0mmol/L 回收率：98%~101.5%

批內(nèi) CV：1.08%~1.60% 批間 CV：3.05%~4.12%

注意事項(xiàng)：

1、 溶血樣本對(duì)檢測(cè)有干擾，盡量避免采用溶血樣本。

2、 OCPC 顯色液偶爾會(huì)結(jié)晶析出，配制成的顯色工作液有時(shí)會(huì)析出，可取上清液使用。

3、 該試劑盒對(duì)鈣離子敏感度較高，測(cè)定器皿一定要干凈，最好使用一次性聚乙烯塑料器皿。

4、 可用血清或肝素抗凝血漿樣本，不宜采用鈣螯合劑及草酸鹽做抗凝劑的樣本。

5、 膽紅素可產(chǎn)生負(fù)干擾，含有較高膽紅素的樣本可用血清對(duì)照消除該干擾。

6、 本法能夠用于自動(dòng)生化分析儀終點(diǎn)檢測(cè)法。

7、 在該試劑盒條件下建議待測(cè)樣品中鈣離子濃度應(yīng)大于 0.5mmol/L 為宜，否則有可能造成檢測(cè)誤差。

8、 如果樣品濃度過高，應(yīng)用蒸餾水稀釋后重測(cè)，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。

有效期：6 個(gè)月有效；常溫運(yùn)輸，4℃保存。