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大鼠孕酮 ELISA試劑盒技術(shù)原理：

(1). 抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。

(2). 結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性。

(3). 酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。

(4). 受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。

(5). 此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。

(6). 加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度（pg-ng/ml水平），并且重復(fù)性好。以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。

大鼠孕酮 ELISA試劑盒操作步驟:

1、包被過程(注意設(shè)置空白對照,陰性對照):

將所用抗原用包被稀釋液稀釋到適當(dāng)濃度(一般所需抗原包被量為每孔20-200μg),每孔抗原加入100μl,置37℃,4h,或4℃,24h;棄去孔中液體.(為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋或?qū)迤椒旁诘撞坑袧窦啿嫉慕饘贊窈兄?

2、封閉酶標反應(yīng)孔:

5%小牛血清置37℃封閉40min.封閉時將封閉液加滿各反應(yīng)孔,并去除各孔中的氣泡,封閉結(jié)束后用洗滌液滿孔洗滌3遍,每遍3min.

洗滌方法:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,將洗滌液注滿板孔,放置2min略作搖動,吸干孔內(nèi)液,傾去液體后在吸水紙上拍干

洗滌次數(shù)3次

3、加入待檢測樣品(建立合適的濃度梯度):

檢測時一般采用1:50-1:400的稀釋度,應(yīng)采用較大稀釋體積進行,一般保證樣品吸取量>20μl.

將稀釋好的樣品加入酶標反應(yīng)孔中,每樣品至少加雙孔,每孔100μl,置于37℃,40-60min.用洗滌液滿孔洗滌3遍,每遍3min.

4、加入酶標抗體:

酶標抗體:根據(jù)酶結(jié)合物提供商提供的參考工作稀釋度進行.37℃,30-60min之間.短于30min往往結(jié)果不穩(wěn)定.每孔加100μl.洗滌同前.

5、加入底物液(現(xiàn)用現(xiàn)配):

TMB-過氧化氫尿素溶液,OPD-過氧化氫底物液系統(tǒng)次之.

底物加入量:每孔100μl,置37℃避光放置3-5分鐘,加入終止液顯色.

6、終止反應(yīng):

每孔加入終止液50μl終止反應(yīng),于20min內(nèi)測定實驗結(jié)果.

7、結(jié)果判斷:

OPD顯色后采用492nm波長,TMB反應(yīng)產(chǎn)物檢測需要450nm波長.檢測時一定要首先進行空白孔系統(tǒng)調(diào)零.用測定標本孔的吸收值與一組陰性標本測定孔平均值的比值(P/N)表示,當(dāng)P/N大于2時作為抗體的效價.(數(shù)值的大小依具體檢測要求而定.)

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大鼠孕酮 ELISA試劑盒經(jīng)過嚴格交叉反應(yīng)和干擾測試及穩(wěn)定性試驗；明確的敏感度；針對所有樣品類型達到的性能；廣泛的檢測范圍可以滿足大多數(shù)檢測要求；完善的售后服務(wù)和免費的免去您的后顧之憂，