白介素12 p35(IL-12 p35)檢測(cè)試劑盒簡(jiǎn)介

IL-12是一由p35和p40（IL-12β）兩條鏈組成的異源二聚體，兩個(gè)亞單位通過(guò)二硫鍵連接在一起，這種結(jié)構(gòu)在目前已發(fā)現(xiàn)的IL中所罕見(jiàn)。通常情況下，p40的量遠(yuǎn)超出p70，在鼠中已觀察到p40同源二聚體的產(chǎn)生，是由轉(zhuǎn)染的細(xì)胞分泌的，p40同源二聚體沒(méi)有生物學(xué)活性，但它能和IL-12Rβ結(jié)合，與p70競(jìng)爭(zhēng)性爭(zhēng)奪IL-12受體（IL-12R）而拮抗其生物學(xué)作用。單獨(dú)的p35不具有生物學(xué)活性，但卻是合成p70的限速因子。

IL-12受體由IL-12Rβ1和IL-12Rβ2組成，兩鏈激活JAK-STAT（連接蛋白-信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子）信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，IL-12*的細(xì)胞效應(yīng)主要是由于STAT4的活化，由以下事例證明:遺傳上STAT4基因缺陷鼠和IL-p40缺陷鼠有同樣的表型。IL-12R主要由活化的T細(xì)胞、NK細(xì)胞、DC細(xì)胞和B細(xì)胞表達(dá)。

白介素12 p35(IL-12 p35)檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)條件選擇

在ELISA中，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的，其中包括:

　?。?）　固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。

　?。?） 包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進(jìn)行包被后，在其它試驗(yàn)條件相同時(shí)，觀察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。選擇OD值z(mì)ui大而蛋白量zui少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1～10μg/ml。

　?。?）　酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定（見(jiàn)酶標(biāo)記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。

（4）　酶的底物及供氫體的選擇：對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無(wú)色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿(mǎn)意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。

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