熒光定量數(shù)據(jù)分析準則，請參考以下幾點

熒光定量是通過熒光染料或熒光標記的特異性的探針，對PCR產物進行標記跟蹤，實時在線監(jiān)控反應過程，結合相應的軟件可以對產物進行分析，計算待測樣品模板的初始濃度。

 熒光定量PCR技術是通過熒光染料或熒光標記的特異性探針，對PCR產物進行標記跟蹤，實時監(jiān)控反應過程。隨著PCR 反應的進行，反應產物不斷累積，熒光信號強度也等比例增加。每經過一個循環(huán)，收集一次熒光強度信號，這樣就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產物量的變化，結合相應的軟件對產物進行分析，可以得到熒光擴增曲線，計算待測樣品初始模版的量。實時熒光定量PCR技術是一次由定性技術向熒光定量定量技術的飛躍，運用該項技術，可以對DNA、RNA樣品進行相對定量、定量和定性分析。 

判斷數(shù)據(jù)的有效性，可以結合擴增曲線，溶解曲線，標準曲線以及NTC（檢驗引物）和NRC（檢驗模板）來分析。

1.擴增曲線應呈現(xiàn)出平滑的S型曲線，起始無擴增，起峰時間正常，由擴增曲線得到的Ct值是判斷實驗成功與否的重要參考，Ct值有一定的可信范圍，臨床檢驗小于33，科學研究小于38，內參基因一般小于20，且樣品間內參的Ct值差不超過1，表明內參基因表達量穩(wěn)定，復孔Ct值標準偏差不超過0.5；

2.溶解曲線應呈現(xiàn)單峰，峰的寬度較小，NTC和NRC無特異的峰出現(xiàn)；

3.標準曲線的斜率范圍-3.58~-3.10，對應引物的擴增效率范圍90%~110%，R2代表線性擬合度，一般大于0.95；

4.NTC用于判斷反應是否存在模板污染，引物是否特異，是否會形成引物二聚體。NTC狀況是沒有擴增，即擴增曲線和溶5.解曲線與基線重合，沒有Ct值。NTC有擴增的情況下，至少與加入模板體系的Ct值相差5或10以上；

6.NRC用于判斷cDNA模板中是否存在基因組DNA殘留，可以間接反映RNA中基因組DNA污染情況，理想情況下，NRC沒有Ct值，有Ct值的話至少要跟加入cDNA模板體系的Ct值相差5或10以上。