甘油含量檢測試劑盒使用詳情

描述：甘油是甘油三酯的水解產(chǎn)物。脂蛋白酯酶能水解血液中的甘油三酯；胰脂酶可以水解食 物 中的甘油三酯；激素敏感脂肪分解酶能水解脂肪細(xì)胞中的甘油三酯。與游離脂肪酸一樣，甘 油含 量是甘油三酯水解反應(yīng)的可靠檢測指標(biāo)，但檢測更方便。本試劑盒采用甘油磷酸氧化酶法 和經(jīng)典 GPO-Trinder 酶學(xué)反應(yīng)相結(jié)合的方法，通過比色法測定液體樣本中的甘油含量。經(jīng)過優(yōu) 化后， 操作步驟更加簡單，檢測線性范圍在 10-1200µmol/L，可靠性和重復(fù)性俱佳，適合生物 醫(yī)學(xué)、 食品實(shí)驗(yàn)室檢測。

 原理：在ATP存在下甘油被甘油激酶磷酸化為3-磷酸甘油，再被甘油磷酸氧化酶氧化產(chǎn)生過氧 化氫；在過氧化物酶作用下生色底物轉(zhuǎn)化為苯醌亞胺，其光密度值與甘油濃度成正比。 

適用范圍：測定血液、細(xì)胞培養(yǎng)基、體液、酒類飲料中的甘油濃度。 

所需設(shè)備：酶標(biāo)儀、生化分析儀或721、722型可見光分光光度計(jì)。佳工作波長550nm，如 無此波長建議優(yōu)先選用570nm、次選530、490nm。 

操作步驟： 

一. 樣本處理： 酒類、飲品、清澈液體樣本：可直接進(jìn)行測定，如超過線性范圍可用蒸餾水或生 理鹽水稀釋后 再測定。 

培養(yǎng)液：取不含酚紅、無顏色、無血清的細(xì)胞培養(yǎng)基，如有細(xì)胞碎片應(yīng)4oC,，12,000g離心5min, 取上清進(jìn)行測定。 

血液：新鮮抗凝血，4oC，2,000g 離心 5min 得到血漿；非抗凝血，先 4oC 靜置 2h 得到血清后， 2000g離心10min,除去血細(xì)胞。將得到的血漿/血清70oC 加熱10分鐘滅活內(nèi)源脂肪酶，12,000g 離 心 10min ,取上清測定或-20oC 保存。 

二 .工作溶液配制：按 4:1 比例，取 4 ml 試劑 R1 與 1 ml 試劑 R2 混合，立即使用或 4oC 保存 <1天，變色棄去。 

三 .標(biāo)準(zhǔn)品稀釋：用蒸餾水、生理鹽水或與樣品緩沖液一致的液體，將4mM甘油標(biāo)準(zhǔn)品倍比稀 釋為 1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 µmol/L，通常取其中 4~6 管即可， 注意設(shè)置 0 濃度對照反應(yīng)管。 

說明： 1、維生素 C>0.18g/L、血紅蛋白>2g/L、膽紅素>0.25g/L、二硫蘇糖醇、巰基乙醇、高濃度 EDTA 干擾測試。 2、正常血清甘油濃度為 20-130µmol/L，細(xì)胞培養(yǎng)時須用不含酚紅的無色無血清培養(yǎng)基，如果 培養(yǎng)基中含有酚紅，可以選擇含有酚紅的無細(xì)胞培養(yǎng)基作為對照進(jìn)行測定