Western及IP細胞裂解液(無抑制劑)操作說明

產品介紹：

Western及IP細胞裂解液(無抑制劑)是一種在非變性條件下裂解細胞或組織樣品從而制備蛋白樣品的裂解液。本細胞裂解液裂解的細胞或組織樣品，可以用于PAGE，Western，免疫沉淀(immunol precipitation，IP)，免疫共沉淀(co-IP)和ELISA等，以及許多兼容1% Triton X-100的酶活性或者生物小分子的檢測。使用本裂解液時，用戶可以根據(jù)具體用途自行添加特定抑制劑或者不添加抑制劑。
本產品可以用于動物、植物的細胞或組織樣品，也可以用于真菌或細菌樣品。

操作方法：

對于培養(yǎng)細胞樣品：

1、融解Western及IP細胞裂解液，混勻。取適當量的裂解液，根據(jù)需要自行確定添加適當?shù)囊种苿┗虿惶砑右种苿?/span>

2、對于貼壁細胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照6孔板每孔加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1-2秒后，細胞就會被裂解。

對于懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成50-100萬細胞/管，然后再裂解。

3、充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

裂解液用量說明：通常6孔板每孔細胞加入100微升裂解液即可，但如果細胞密度非常高可以適當加量到150微升或200微升。每100萬細胞用100微升本產品裂解后獲得的上清，其蛋白濃度約為2-4mg/ml，不同細胞有所不同。

對于組織樣品：

1、把組織剪切成細小的碎片。

2、融解Western及IP細胞裂解液，混勻。取適當量的裂解液，根據(jù)需要自行確定添加適當?shù)囊种苿┗虿惶砑右种苿?/span>

3、按照每20毫克組織加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量。)

4、用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

5、充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。每20mg凍存的小鼠肝臟組織用200微升本裂解液裂解后獲得的上清，其蛋白濃度約為15-25mg/ml，不同狀態(tài)的不同組織有所不同。

6、如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈渦旋使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

注意事項：

1、如需添加蛋白酶抑制劑等，需自行準備。

2、裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進行。

3、對于某些特殊蛋白的IP，若Western及IP細胞裂解液效果不是非常理想，可以嘗試用RIPA裂解液(強、中或弱)或NP-40裂解液。如果IP的時候背景很高，則應考慮選用裂解強度較高的裂解液，例如RIPA裂解液(強或中)。如果發(fā)現(xiàn)目的蛋白無法被IP下來，則說明裂解液的強度過強，可以使用較為溫和的裂解液例如RIPA裂解液 (弱)或NP-40裂解液。

4、對于某些難溶解蛋白的Western，如果發(fā)現(xiàn)Western及IP細胞裂解液 (P0013)效果不是非常理想，可以嘗試使用裂解強度更高的裂解液例如RIPA裂解液(強、中)或SDS裂解液。

5、本產品僅供科研實驗用，不做其它用途。

6、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。