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高遷移率族蛋白B1對大鼠脾臟樹突狀細(xì)胞免疫功能影響及機制研究

高遷移率族蛋白B1(HMGB1)作為一種晚期炎癥介質(zhì)，介導(dǎo)了膿毒癥和其他系統(tǒng)性炎癥的致死性效應(yīng)，研究其病理生理作用將有助于深化對膿毒癥發(fā)病機制的認(rèn)識，并為免疫反應(yīng)的調(diào)控提供潛在的干預(yù)目標(biāo)。本試驗擬應(yīng)用HMGB1體外刺激大鼠脾臟樹突狀細(xì)胞(DC)，闡明HMGB1對DC免疫功能的影響并對其機制進行初步探討，旨在為膿毒癥及多器官功能障礙綜合征的預(yù)防和治療提供新思路。 方法：分離正常Wistar大鼠脾臟DC，在含10％小牛血清的1640培養(yǎng)液中調(diào)整細(xì)胞濃度1×10<'6>/孔后置于24孔培養(yǎng)板。實驗一：采用HMGB1刺激，觀察HMGB1刺激與DC表面共刺激分子CD80、CD86和主要組織相容性復(fù)合物(MHC)Ⅱ表達(dá)、細(xì)胞因子白介素(IL)-12、腫瘤壞死因子(TNF)-α基因表達(dá)和蛋白合成的時間-效應(yīng)關(guān)系及劑量-效應(yīng)關(guān)系。實驗二：HMGB1刺激后，采用激光掃描共聚焦顯微鏡和流式細(xì)胞術(shù)檢測DC表面晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(RAGE)的表達(dá)強度。同時觀察抗RAGE抗體對HMGB1刺激后DC表面共刺激分子CD80、CD86和MHC Ⅱ表達(dá)的影響。實驗三：采用1μg/ml的HMGB1刺激48小時(h)，DC與脾T淋巴細(xì)胞的細(xì)胞比例分別為1：50、1：100、1：150、1：200混合，于共同作用后3天、5天觀察T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)、功能性極化、IL-2、白介素-2受體(IL-2R)基因/蛋白表達(dá)及核因子(NF)-кB活性的情況。 結(jié)論： 1．HMGB1能誘導(dǎo)DC表面共刺激分子表達(dá)增強和IL-12、TNF-α的合成、釋放，HMGB1可能是誘導(dǎo)DC成熟的重要免疫刺激信號。 2．HMGB1能上調(diào)DC受體RAGE表達(dá)，RAGE可能是參與HMGB1誘導(dǎo)DC成熟分化的主要受體之一。 3．HMGB1誘導(dǎo)的DC使脾T淋巴細(xì)胞對絲裂原刺激的增殖反應(yīng)明顯增強，并促進T淋巴細(xì)胞向Th1功能性極化。 4．初步明確了HMGB1誘導(dǎo)的DC影響脾T淋巴細(xì)胞IL-2生成和IL-2R表達(dá)的相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。